伴隨著高溫環(huán)境,左旋 DNA 也會(huì)發(fā)生變性變成單鏈,使得熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)。通過(guò)分析熒光信號(hào)的累積速度,研究人員可以確定所有雙鏈分離的精確時(shí)間點(diǎn)。
同時(shí),我們還需要合成左旋引物(標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán))。當(dāng) PCR 反應(yīng)進(jìn)行至退火步驟,引物會(huì)與左旋 DNA 單鏈集合,其淬滅基團(tuán)會(huì)抑制熒光信號(hào)。這時(shí)候,熒光信號(hào)又會(huì)發(fā)生變化,從而便于研究人員分析引物與所有 DNA 單鏈結(jié)合的時(shí)間點(diǎn)。
值得注意的是,左旋 DNA 的量并不會(huì)改變,因?yàn)樗粎⑴c擴(kuò)增步驟。
研究人員表示,這一適應(yīng)性 PCR 技術(shù)可以彌補(bǔ)傳統(tǒng) PCR 儀器的局限性,它可以讓基于 PCR 的診斷有機(jī)會(huì)脫離實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,例如樣本制備的高標(biāo)準(zhǔn)、反應(yīng)溫度的嚴(yán)密控制。